Overzicht
Icatibant-acetaat is een ziektespecifieke behandeling voor hemangioid angioom (HAE), ontwikkeld door Shire, die op 25 augustus 2011 door de FDA werd goedgekeurd, voor de behandeling van acute episoden van erfelijk angio-oedeem bij volwassenen van 18 jaar en ouder. Het is ook het derde medicijn dat door de FDA is goedgekeurd voor de behandeling van HAE-aanvallen. Icatibant-acetaat heeft een structuur die lijkt op een bradykinine-achtig d-decapeptide, maar bevat vijf niet van eiwitten afgeleide aminozuren. Het werkt als een krachtige, selectieve competitieve antagonist van bradykinine type 2 (B2)-receptoren en verlicht lokale zwelling, ontsteking en pijn geassocieerd met HAE-episodes door de effecten van bradykinine te remmen. HAE vertegenwoordigt slechts één van de vele potentiële indicaties waarvoor icatibant geïndiceerd kan zijn; andere mogelijke toepassingen zijn onder meer astma, levercirrose en andere soorten angio-oedeem. Bijgevolg vertoont icatibantacetaat aanzienlijke therapeutische waarde en brede marktvooruitzichten.
Chemische structuurformule vanIcatibant-acetaat
EessentieelIinformatie
Chinese naam:goede kwaliteit foto
Engelse naam: Icatibant-acetaat
Bedrijfs-ID：GT-F005
CAS：138614-30-9；130308-48-4
Serieel nummer：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH
Moleculaire formule：C59H89N19O13S
Moleculair gewicht：1304.52
Icatibant-acetaat MS-spectrum
Synthetische route
1: Bereiding van Fmoc-Arg(Pbf)-CTC-hars
Voeg 11,1 g 2-chloortrifenylmethylicloridehars met een substitutiesnelheid van 0,9 mmol/g toe aan de vaste-fase-reactiekolom, gevolgd door toevoeging van met DMF gezwollen hars gedurende 30 minuten. Voeg 3,50 toeμ1 DIPEA aan 12,98 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH en activeer gedurende 5 minuten; voeg vervolgens de met DMF gezwollen hars toe en laat het mengsel na 10 minuten een evenwicht bereiken. Voeg nog eens 3,50 toeμ1 DIPEA, laat 45 minuten bij kamertemperatuur reageren en sluit tenslotte 20 minuten af met methanol. Damp het reactiemengsel in, was driemaal met DMF, driemaal met DCM en contracteer vervolgens driemaal met methanol gedurende respectievelijk 3 minuten, 5 minuten en 8 minuten, wat Fmoc-Arg(Pbf)-CTC-hars oplevert met een gemeten substitutiesnelheid van 0,5 mmol/g.
2：Koppeling van Fmoc-Oic-OH
Weeg 10 mmol Fmoc-Arg (Pbf)-CTC-hars af en voeg het toe aan een vastefasereactor, zwel het gedurende 0,5 uur in DMF en verwijder vervolgens de Fmoc-bescherming tweemaal met behulp van 20% DBLK-oplossing gedurende respectievelijk 10 minuten en 5 minuten; conjugeer het na het wassen met Fmoc-Oic-OH. Los 11,73 g Fmoc-Oic-OH, 4,9 g HOBt en 6,1 ml DIC op in DCM (een kleine hoeveelheid DMF kan worden toegevoegd voor solubilisatie), activeer het mengsel gedurende 7 minuten in een ijswaterbad, breng het vervolgens over naar de vastefasereactor en laat het gedurende 1 minuut bij kamertemperatuur reageren.–2 uur. Het eindpunt van de reactie wordt bepaald met de indantronmethode. Zuig na voltooiing het reactiemengsel op, was met DMF, verwijder de Fmoc-bescherming tweemaal met behulp van 20% DBLK-oplossing gedurende respectievelijk 10 minuten en 5 minuten, was opnieuw en bereid je voor op koppeling met het volgende aminozuur.
3：Koppeling van Fmoc-D-Cit-OH
Los 11,91 g Fmoc-D-Cit-OH, 5,00 g HOAt en 11,4 g HATU op in DCM (met een kleine hoeveelheid DMF toegevoegd voor solubilisatie). Voeg 3,87 g DIPEA toe onder een ijswaterbad en activeer gedurende 7 minuten; breng het mengsel vervolgens over naar een vastefasereactor en laat het gedurende 1 uur bij kamertemperatuur reageren–2 uur. De voltooiing van de reactie wordt bepaald met de indiolmethode. Verwijder na de reactie het reactiemengsel, was met DMF en elimineer de Fmoc-bescherming met behulp van een 20% DBLK-oplossing. Bereid je na het wassen voor op koppeling met het volgende aminozuur.
4：Koppeling van Fmoc-Ser(tBu)-OH
Los 11,49 g Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5,00 g HOAt en 6,1 ml DIC op in DCM (met een kleine hoeveelheid DMF toegevoegd voor solubilisatie). Na activering gedurende 7 minuten onder een ijswaterbad wordt het mengsel overgebracht naar een vastefasereactor en gedurende 1 minuut bij kamertemperatuur gereageerd.–2 uur; voltooiing van de reactie wordt bepaald door de indiolmethode. Verwijder na voltooiing het reactiemengsel, was met DMF en elimineer vervolgens de Fmoc-bescherming met behulp van een 20% DBLK-oplossing, gevolgd door wassen voordat u doorgaat met koppelen met het volgende aminozuur.
5：Koppeling van Fmoc-Dit-OH
Los 11,79 g Fmoc-Thi-OH, 5,00 g HOBt en 11,37 g HBTU op in DCM (met een kleine hoeveelheid DMF toegevoegd voor solubilisatie). Voeg 3,87 g DIPEA toe onder een ijswaterbad en activeer gedurende 7 minuten; breng het mengsel vervolgens over naar een vastefasereactor en laat de reactie gedurende 1 uur bij kamertemperatuur plaatsvinden–2 uur. De voltooiing van de reactie wordt bepaald met de indiolmethode. Verwijder na de reactie het reactiemengsel, was met DMF en elimineer de Fmoc-bescherming met behulp van een 20% DBLK-oplossing. Bereid je na het wassen voor op koppeling met het volgende aminozuur.
6：Koppeling van Fmoc-Gly-OH
Los 8,91 g Fmoc-Gly-OH, 5,00 g HOBt en 9,63 g TBTU op in DCM (met een kleine hoeveelheid DMF toegevoegd voor solubilisatie). Voeg 3,63 g TMP toe onder een ijswaterbad en activeer gedurende 7 minuten; breng het mengsel vervolgens over naar een vastefasereactor en laat de reactie gedurende 1 uur bij kamertemperatuur plaatsvinden–2 uur. De voltooiing van de reactie wordt bepaald met de indanonmethode. Verwijder na de reactie het reactiemengsel, was met DMF en elimineer de Fmoc-bescherming met behulp van een 20% DBLK-oplossing. Bereid je na het wassen voor op koppeling met het volgende aminozuur.
7：Koppeling van Fmoc-Hyp(tBu)-OH
Los 12,27 g Fmoc-Hyp(tBu) op–OH, 5,00 g HOAt en 9,66 g TATU in DCM (met een kleine hoeveelheid DMF toegevoegd voor solubilisatie). Voeg 3,63 g TMP toe onder een ijswaterbad en activeer gedurende 7 minuten; breng het mengsel vervolgens over naar een vastefasereactor en laat het gedurende 1 uur bij kamertemperatuur reageren–2 uur. Het reactie-eindpunt wordt bepaald met de indiolmethode. Verwijder na voltooiing het reactiemengsel, was met DMF en elimineer de Fmoc-bescherming met behulp van een 20% DBLK-oplossing. Bereid je na het wassen voor op koppeling met het volgende aminozuur.
8：Koppeling van Fmoc-Pro-OH
Los 10,11 g Fmoc-Pro-OH, 5,00 g HOAt en 11,4 g HATU op in DCM (met een kleine hoeveelheid DMF toegevoegd voor solubilisatie). Voeg 3,87 g DIPEA toe onder een ijswaterbad en activeer gedurende 7 minuten; breng het mengsel vervolgens over naar een vastefasereactor en laat het gedurende 1 uur bij kamertemperatuur reageren–2 uur. Het reactie-eindpunt wordt bepaald met de indiolmethode. Verwijder na voltooiing het reactiemengsel, was met DMF en elimineer de Fmoc-bescherming met behulp van 20% DBLK. Bereid je na het wassen voor op koppeling met het volgende aminozuur.
9：Koppeling van Fmoc-Arg(Pbf)-OH
Los 19,44 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt en 11,4 g HATU op in DCM (met een kleine hoeveelheid DMF toegevoegd voor solubilisatie). Voeg 3,87 g DIPEA toe onder een ijswaterbad en activeer gedurende 7 minuten; breng het mengsel vervolgens over naar een vastefasereactor en laat het gedurende 1 uur bij kamertemperatuur reageren–2 uur. De voltooiing van de reactie wordt bepaald met de indiolmethode. Verwijder na de reactie het reactiemengsel, was met DMF en elimineer de Fmoc-bescherming met behulp van een 20% DBLK-oplossing. Bereid je na het wassen voor op koppeling met het volgende aminozuur.
10：Koppeling van Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH
Los 19,44 g Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt en 11,4 g HATU op in DCM (met een kleine hoeveelheid DMF toegevoegd voor solubilisatie). Voeg 3,87 g DIPEA toe onder een ijswaterbad en activeer gedurende 7 minuten; breng het mengsel vervolgens over naar een vastefasereactor en laat het gedurende 1 uur bij kamertemperatuur reageren–2 uur. Het reactie-eindpunt wordt bepaald met de indiolonmethode. Verwijder na voltooiing het reactiemengsel, was met DMF en gebruik vervolgens 20% DBLK om de Fmoc-bescherming te verwijderen. Was driemaal met DMF, driemaal met DCM en driemaal met methanol voor contractie (respectievelijk gedurende 3 minuten, 5 minuten en 8 minuten), gevolgd door vacuümdrogen om etibant peptide-acetaathars te verkrijgen.
HPLC-chromatogram van Icatibant-acetaat
11：Harspyrolyse van Icatibant-acetaat
Bereid 200 ml lysisreagens met 190 ml trifluorazijnzuur, 6 ml triisopropylsilaan en 4 ml water en koel het gedurende 30 minuten voor in de koelkast. Voeg 20,0 g etibant-peptideacetaathars toe aan een rondbodemkolf van 500 ml en voeg vervolgens het bereide 200 ml lysisreagens toe aan de hars terwijl u roert onder een ijsbad en onder een stikstofstroom. Verwijder na 30 minuten reactie het ijsbad en zet de reactie gedurende 2 uur voort bij kamertemperatuur. Filtreer de hars en verzamel het filtraat. Was de hars met een kleine hoeveelheid trifluorazijnzuur, filtreer en combineer de filtraten. Voeg het filtraat geleidelijk toe aan 20 L ijskoude ether; er vormt zich een wit neerslag. Centrifugeer bij 3000 rpm om het neerslag te verzamelen, was vijf keer met ijskoude ether en droog onder verlaagde druk om 10,3 g ruw peptide te verkrijgen met HPLC-zuiverheid>90%.
