5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'- O-(O-2-cyaanethyl-N,N-diisopropylaMino)fosforaMidiet

5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoethyl-N,N-diisopropylaMino) fosforamidiet is het standaardmonomeer voor het introduceren van 5-methyl-2'-deoxycytidineresiduen in synthetisch DNA en antisense-oligonucleotiden. De N4-benzoylgroep beschermt het exocyclische amine van de cytosinebase en voorkomt vertakkingsreacties tijdens vaste-fasesynthese. De 5-methylgroep op de cytosinering verhoogt de thermische stabiliteit van duplexen gevormd met complementair DNA of RNA (ΔTm ≈ +0,5–1,0°C per modificatie) en, belangrijker nog, vermindert het immuunstimulerende potentieel van CpG-motieven bij gebruik in antisense- of CpG-gebaseerde vaccins. 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoethyl-N,N-diisopropylaMino) fosforamidiet is volledig compatibel met standaard DNA-synthesecycli (koppelingstijd 2-3 minuten, activator zoals tetrazol of DCI) en standaard deprotectieomstandigheden (geconcentreerd NH₃, 55°C, 8–16 uur). 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoethyl-N,N-diisopropylaMino) fosforamidiet is ook een belangrijk tussenproduct in de synthese van vergrendelde nucleïnezuur (LNA)-bevattende oligonucleotiden wanneer het wordt gecombineerd met andere gemodificeerde monomeren. Dit fosforamidiet wordt vaak gebruikt bij de vervaardiging van door de FDA goedgekeurde antisense-medicijnen en bij onderzoekstoepassingen waarbij epigenetische regulatie en DNA-methylatieanalyse worden onderzocht.

Productparameters

Kwaliteitsborging bij Cosperpharm

Elke batch ondergaat:

● Gaschromatografie (GC) – zuiverheid ≥97,0%

● Niet-waterige titratie – zuiverheid ≥97,0%

● Brekingsindex – bevestigende analyse

● ¹H NMR – structurele verificatie

● Uiterlijk – kleurloze tot lichtgele tot lichtoranje heldere vloeistof

Elke zending wordt vergezeld van een uitgebreid COA, MSDS (met volledige GHS-informatie) en een certificaat van oorsprong.

Opslagomstandigheden

Bewaar 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'-O-(O-2-cyaanethyl-N,N-diisopropylaMino)fosforamidiet in een goed afgesloten container onder inerte atmosfeer (stikstof of argon) bij –20°C voor langdurige opslag. Kortstondige opslag (tot 3 maanden) bij 2–8°C onder uitdroging kan acceptabel zijn, maar voor langere perioden wordt niet aanbevolen. Houd de container droog, beschermd tegen licht en uit de buurt van sterke oxidatiemiddelen en zuren. De verbinding is zeer vochtgevoelig; alleen openen onder watervrije omstandigheden (handschoenenkastje of met argonspoeling). Na opening ongebruikt materiaal onmiddellijk onder argon terugbrengen naar –20°C.

Houdbaarheid: 2–3 jaar indien bewaard bij –20°C in een afgesloten, inert gespoelde container met droogmiddel.

Voorzorgsmaatregelen bij hantering: Gebruik in een zuurkast. Draag nitrilhandschoenen, een veiligheidsbril en een laboratoriumjas. Vermijd het genereren van stof. Handen wassen na gebruik. Raadpleeg het veiligheidsinformatieblad voor volledige veiligheidsinformatie.

Productvoordelen

1. 5-Methylcytosine voor verbeterde duplexstabiliteit en nucleaseresistentie

De 5-methylgroep op de cytosinebasis verhoogt de smelttemperatuur (Tm) van DNA/DNA- en DNA/RNA-duplexen met ongeveer 0,5–1,0 °C per modificatie. Deze thermische stabilisatie is bijzonder waardevol in antisense-oligonucleotiden, waarbij een hogere bindingsaffiniteit zich vertaalt in een verbeterde potentie en een lagere vereiste dosis. De methylgroep verleent ook verhoogde resistentie tegen bepaalde nucleasen.

2. Verminderde immunostimulatie van CpG-motieven

Niet-gemethyleerde CpG-dinucleotiden worden herkend door Toll-like receptor 9 (TLR9) in menselijke immuuncellen, wat leidt tot ongewenste immuunstimulerende effecten. Het opnemen van 5-methylcytosine in CpG-motieven (waarbij CpG wordt omgezet in 5-meCpG) vermindert de TLR9-herkenning, waardoor de off-target cytokine-afgifte in antisense- en siRNA-toepassingen wordt verminderd. 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoethyl-N,N-diisopropylaMino) fosforamidiet maakt deze kritische immunomodulatie mogelijk.

3. Volledige compatibiliteit met standaard DNA-synthese en deprotectie

5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoethyl-N,N-diisopropylaMino) fosforamidiet gebruikt hetzelfde beschermende groepenschema als standaard 2′-deoxycytidine fosforamidiet (DMT op 5′, Bz op N4, CE op 3′), met het enige verschil zijnde de 5-methylsubstituent. Daarom zijn er geen wijzigingen aan de synthesecycli, activatoroplossingen of deprotectieomstandigheden vereist; het werkt naadloos op alle standaard DNA-synthesizers.

4. Essentieel voor CpG-eilandmethylatiestudies

In epigenetisch onderzoek worden oligonucleotiden met gedefinieerde 5-methylcytosinepatronen gebruikt als substraten voor methyltransferasen, als standaarden voor bisulfietsequencing en als probes voor methylbindende eiwitten. Met 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoethyl-N,N-diisopropylaMino) fosforamidiet kunnen onderzoekers op maat gemaakte gemethyleerde DNA-sequenties synthetiseren zonder enzymatische methylering, wat vaak onvolledige of heterogene patronen oplevert.

5. Antisense oligonucleotide-therapieën

Verschillende door de FDA goedgekeurde antisense-medicijnen (bijv. nusinersen, inotersen) bevatten 5-methylcytosineresiduen om de stabiliteit te verbeteren en de immunogeniciteit te verminderen. 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoethyl-N,N-diisopropylaMino)fosforamidiet is het monomeer bij uitstek voor de productie van dergelijke therapieën op commerciële schaal.

Neem contact met ons op

Op zoek naar een vertrouwde leverancier van 5'-O-(4,4'-DiMethoxytrityl)-N4-benzoyl-2'-deoxy-5-Methylcytidine-3'-O-(O-2-cyanoethyl-N,N-diisopropylaMino) fosforamidiet? Cosperpharm staat klaar om producten van hoge kwaliteit, uitgebreide documentatie en responsieve technische ondersteuning te bieden.