5-aminofluoresceïne

5-Aminofluoresceïne (ook wel 5-AF of Fluoresceïneamine genoemd) wordt veel gebruikt als fluorescerend labelingsreagens. Het primaire amine van 5-aminofluoresceïne kan reageren met carboxylgroepen (via EDC/NHS-activering), aldehyden, ketonen of geactiveerde esters (bijvoorbeeld NHS-esters) om stabiele amide- of iminebindingen te vormen. Het vertoont een excitatiemaximum bij ~490 nm (λmax = 496 nm in boraatbuffer pH 8,5) en een emissiemaximum bij ~515 nm, wat een heldergroen signaal oplevert met goede fotostabiliteit en een Stokes-verschuiving van ongeveer 40 nm. De fluorescentie-intensiteit is pH-afhankelijk en neemt met name toe onder alkalische omstandigheden (pH 8-9), wat wordt toegeschreven aan veranderingen in de protonatietoestand van de aminogroep.

5-Aminofluoresceïne wordt breed gebruikt in biologisch en medisch onderzoek – van het labelen van eiwitten en antilichamen tot het bouwen van gerichte medicijnafgiftesystemen en fluorescentiesensoren. 5-Aminofluoresceïne is ook een belangrijk tussenproduct bij de synthese van fluoresceïne-isothiocyanaat (FITC-isomeer I), een van de meest populaire reagentia voor het labelen van eiwitten.

Productparameters

Opmerkingen over voorbereiding en opslag

5-AF wordt doorgaans gesynthetiseerd uitgaande van 4-nitroftaalzuur, gevolgd door reductie (bijvoorbeeld met hydrazine/FeOOH) en condensatie met resorcinol in methaansulfonzuur. Het ruwe product is een mengsel van 5- en 6-isomeren, die door kristallisatie worden gescheiden. Moderne methoden (met behulp van de magnetron of enzymatisch) kunnen de opbrengst verbeteren en de bijproducten verminderen. De uiteindelijke zuivering door HPLC garandeert een zuiverheid van ≥95%, waarbij de structuur wordt bevestigd door NMR en MS.

Opslag – De verbinding is gevoelig voor licht, lucht en vocht. Bewaren in een afgesloten, met argon gespoelde container bij 4 °C in het donker. Voor langdurige opslag (>6 maanden) wordt -20°C als poeder aanbevolen (stabiel gedurende minimaal 3 jaar). Oplossingen in DMSO kunnen gedurende 6 maanden bij -80°C of gedurende 1 maand bij -20°C worden bewaard. Vermijd herhaalde vries-dooicycli. Transport bij omgevingstemperatuur is acceptabel, mits beschermd tegen licht en vocht.

Veelgestelde vragen (FAQ)

Vraag 1: Wat is het verschil tussen 5-aminofluoresceïne (5-AF) en FITC? Hoe kies ik?

A: Beide zijn groen-fluorescerende kleurstoffen, maar hun reactieve groepen verschillen.

● 5-AF heeft een primair amine (–NH₂). Het vereist activering van de carboxylgroep van een doelwit (met behulp van EDC/NHS) vóór conjugatie. Het beste voor het labelen van moleculen die al een carboxylgroep bevatten.

● FITC heeft een isothiocyanaatgroep (–N=C=S) die direct reageert met aminen op het doelwit (bijvoorbeeld lysineresiduen in eiwitten) – er is geen voorafgaande activering nodig. FITC is handiger voor routinematige eiwitlabeling.

● Kies 5-AF als u een specifieke, georiënteerde conjugatie nodig heeft (bijvoorbeeld via een carboxylhandvat) of als u van plan bent aangepaste fluorescerende derivaten te synthetiseren. FITC is over het algemeen eenvoudiger voor directe labeling van antilichamen.

Vraag 2: Wat zijn typische reactieomstandigheden voor het labelen van biomoleculen met 5-AF?

A: De meest gebruikelijke methode is amidekoppeling: activeer carboxylgroepen op het doelmolecuul met EDC en NHS (in MES- of PBS-buffer, pH 5,5–6,5), voeg vervolgens 5-AF toe en pas aan op pH 7,5–8,5. Incubeer bij kamertemperatuur of 37°C gedurende 2-4 uur. Gebruik voor aldehydehoudende doelwitten (bijvoorbeeld glycoproteïnen) reductieve aminering met natriumcyanoboorhydride. Niet-gereageerde kleurstof kan worden verwijderd door ontzouting of dialyse. Een molaire verhouding van kleurstof tot eiwit van 5:1 tot 20:1 is een goed uitgangspunt.

Waarom Cosperpharm? – Onze concurrentievoordelen

Neem contact met ons op

Of u nu een klein monster nodig heeft voor een pilot-experiment of bulkhoeveelheden voor commerciële productie, Cosperpharm staat klaar om u te ondersteunen. Neem vandaag nog contact met ons op om uw vereisten voor 5-aminofluoresceïne te bespreken – en laten we kijken hoe we u kunnen helpen uw project vooruit te helpen.